2021年11月1日，日本一三共宣布其溶瘤病毒療法Delytact正式在日本上市，用于治療惡性膠質(zhì)瘤患者，定價(jià)143萬(wàn)日元（折合人民幣8萬(wàn)元）一針。這是一款獲批用于原發(fā)性腦膠質(zhì)瘤治療的溶瘤病毒產(chǎn)品。（參考閱讀：快訊|腦膠質(zhì)瘤溶瘤病毒療法獲批上市）

　　據(jù)了解，Delytact（Teserpaturev/G47?）是一種基因工程溶瘤單純皰疹病毒1型(HSV-1)，是一三共與日本東京大學(xué)醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所的聯(lián)合開(kāi)發(fā)的三代溶瘤病毒。

　　根據(jù)相關(guān)臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，溶瘤病毒療法Delytact治療惡性腦膠質(zhì)瘤的1年生存率高達(dá)92.3%，是常規(guī)治療的6倍左右，提升了惡性腦膠質(zhì)瘤患者的生存率。

　　溶瘤病毒是什么？

　　溶瘤病毒（oncolytic virus，OV）是一類(lèi)能夠特異性復(fù)制并引起癌細(xì)胞凋亡，同時(shí)保留正常組織不被損害的病毒。溶瘤病毒療法是一種前景廣闊的癌癥治療方法，迄今已報(bào)告了70多項(xiàng)臨床試驗(yàn)。OV可以分為2個(gè)主要類(lèi)別——天然病毒和轉(zhuǎn)基因病毒。天然存在的OV包括呼腸孤病毒、新城疫病毒（NDV）、腸病毒和麻疹病毒（MV）等，而大多數(shù)OV都經(jīng)過(guò)基因修飾，以增加病毒向腫瘤細(xì)胞的向性、提高病毒的選擇性復(fù)制和裂解潛能，并增強(qiáng)宿主的抗腫瘤免疫。

　　具有溶瘤活性的病毒有多種類(lèi)型，下面展開(kāi)詳細(xì)介紹。

圖1一些用于癌癥治療的溶瘤病毒的示意圖

　　許多病毒已被用于癌癥治療，包括雙鏈DNA病毒，如AdV、單純皰疹病毒(HSV)和VACV；單鏈DNA病毒，如細(xì)小病毒；負(fù)義單鏈RNA病毒，如新城疫病毒（NDV）、麻疹病毒（MV）和水泡性口炎病毒（VSV）；正鏈單鏈RNA病毒，如脊髓灰質(zhì)炎病毒和柯薩奇病毒；和雙鏈RNA病毒，如呼腸孤病毒。naked/enveloped描述病毒類(lèi)型；high/moderate/low描述OV的基因組容量。

　　腺病毒

　　腺病毒（Ads）是一種非包膜的雙鏈DNA病毒，具有30-38 kb的線(xiàn)性基因組和二十面體衣殼。感染人的Ads根據(jù)其DNA同源性、致癌性、血凝作用和血清中和特性可分為7種（A-G）?；趯?duì)腺病毒基因組結(jié)構(gòu)和生命周期的了解以及腺病毒穩(wěn)定的生理特性，對(duì)腺病毒進(jìn)行基因操作相對(duì)容易實(shí)現(xiàn)。大多數(shù)基因工程溶瘤腺病毒（OAd）來(lái)源于Ad血清型5（圖2），HAdV-C5是較常研究的一種。

　　在必需的腺病毒基因中進(jìn)行小部分的缺失并進(jìn)行遺傳修飾可誘導(dǎo)溶瘤腺病毒的腫瘤選擇性（圖3）。E1B-55K和E1A基因的缺失可分別引起p53和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（pRb）突變癌細(xì)胞中Ads的選擇性復(fù)制。溶瘤腺病毒的先驅(qū)是ONYX-015，該病毒在E1B-55K基因以及E3B和rid基因中有14.7k基因缺陷。Oncorine（H101）是一個(gè)被監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)用于臨床的OV，與ONYX-015結(jié)構(gòu)相似，它刪除了E1B55K蛋白在正常細(xì)胞中使p53失活的編碼區(qū)，導(dǎo)致該病毒只能在p53功能異常的惡性細(xì)胞中復(fù)制；除了E1B編碼基因的缺失外，Oncorine還在E3區(qū)域進(jìn)行了部分缺失。E1A區(qū)域的缺失也被用來(lái)構(gòu)建溶瘤Ads，由于E1A與pRb結(jié)合，E1A中24bp（Delta24）的缺失導(dǎo)致E2F的釋放，較終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞中的病毒復(fù)制。2005年，Oncorine（H101）被中國(guó)FDA批準(zhǔn)用于聯(lián)合順鉑或5-氟尿嘧啶（5-FU）或兩者聯(lián)合治療鼻咽癌。其他正在進(jìn)行臨床評(píng)估的OAd包括LOAd703、VCN-01、Telomelysin(OBP-301)和ONCOS-102，這些OAd產(chǎn)生了合適的抗腫瘤功效并且在患者中具有良好的耐受性。

圖2野生型血清5型腺病毒基因組

　　基因組由4個(gè)早期轉(zhuǎn)錄元件（E1、E2、E3和E4）和5個(gè)與腺病毒顆粒組裝相關(guān)的晚期表達(dá)基因（L1-L5）組成。E1基因是激活早期基因轉(zhuǎn)錄所必需的；病毒DNA復(fù)制需要E2基因；E3基因是調(diào)節(jié)和逃避宿主免疫反應(yīng)、通過(guò)細(xì)胞凋亡防止細(xì)胞過(guò)早死亡以及新粒子組裝完成后合適細(xì)胞裂解所必需；E4基因參與病毒RNA代謝和運(yùn)輸、宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的優(yōu)先下調(diào)以及病毒DNA復(fù)制的增強(qiáng)。E1和E3基因的缺失較多可容納7.5 kb的外源DNA，通常用于基因治療。E4基因缺失進(jìn)一步減少了載體特異性免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)，并較大限度地減少了包裝細(xì)胞系中具有復(fù)制能力的病毒的生長(zhǎng)。

圖3常見(jiàn)溶瘤腺病毒載體的遺傳修飾

　　(A)野生型血清5型腺病毒。(B)ONYX-015，刪除了能夠在p53缺陷型人類(lèi)腫瘤細(xì)胞中復(fù)制的E1b-55k(2496-3323)區(qū)域。(C)H101，刪除整個(gè)E1B基因和E3區(qū)域中的78.3-85.8 nm基因片段，該片段負(fù)責(zé)腺病毒死亡蛋白的編碼。(D)Ad5-Δ24RGD在E1A區(qū)域攜帶24 bp(919-943)缺失，負(fù)責(zé)結(jié)合Rb蛋白和RGD基序插入纖維。(E)ZD55刪除了E1B 55-kD基因并帶有外源基因。(F)ICOVIR5，溶瘤腺病毒，其中內(nèi)源性E1A啟動(dòng)子已被用DM-1絕緣的人E2F-1啟動(dòng)子取代。(G)Gendicine是一種重組人血清型5腺病毒，其中E1區(qū)被人野生型p53表達(dá)盒取代。Gendicine是一種重組人血清型5腺病毒，其中E1區(qū)被人野生型p53表達(dá)盒取代。p53基因由帶有牛生長(zhǎng)激素(BGH)poly(A)尾的勞斯肉瘤病毒(RSV)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)。

　　單純皰疹病毒

　　單純皰疹病毒(HSV)，是1型HSV(HSV-1)，是作為OV研究較廣泛的DNA病毒之一。HSV-1是一種有包膜的雙鏈線(xiàn)性DNA病毒，具有152 kb的大基因組，其中部分基因?qū)?fù)制來(lái)說(shuō)是不必要的，因此在不限制病毒包裝效率的前提下，為添加工程化轉(zhuǎn)基因留下了空間（圖4）。HSV-1強(qiáng)大的毒力和免疫原性具有“雙刃劍”效應(yīng)：毒力和免疫原性使合適的溶瘤和抗腫瘤免疫反應(yīng)成為可能；然而，其快速免疫介導(dǎo)的病毒清除和潛在的細(xì)胞毒性會(huì)引發(fā)遞送和順利問(wèn)題。為了實(shí)現(xiàn)腫瘤選擇性和優(yōu)化療效，科研人員已經(jīng)創(chuàng)建了幾種HSV突變體（圖5）并將其應(yīng)用于多種類(lèi)型的腫瘤。

　　T-Vec（talimogenelaherparepvec）是美國(guó)食品和藥物管理局（FDA）批準(zhǔn)的一個(gè)OV，是一種溶瘤性HSV-1，其基因組中有2個(gè)缺失：ICP34.5和ICP47。編碼神經(jīng)毒力因子的ICP34.5缺失阻止了病毒在神經(jīng)元中的復(fù)制，而不影響病毒在其他細(xì)胞，是腫瘤細(xì)胞中的復(fù)制。ICP34.5對(duì)于阻斷宿主抗病毒先天免疫蛋白激酶R-干擾素(PKR-IFN)途徑至關(guān)重要；大多數(shù)腫瘤細(xì)胞缺乏PKR通路，使ICP34.5缺失的HSV對(duì)癌細(xì)胞更具選擇性。T-VEC含有GM-CSF（代替ICP34.5），可促進(jìn)樹(shù)突細(xì)胞成熟并增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)。編碼抗原呈遞控制劑的ICP47的缺失導(dǎo)致腫瘤相關(guān)抗原和病毒抗原進(jìn)入主要組織相容性復(fù)合體（MHC）Ⅰ類(lèi)復(fù)合體，并促進(jìn)針對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答。

　　另一種HSV突變體HF10也在幾種腫瘤中進(jìn)行了臨床評(píng)估。較近，一項(xiàng)研究報(bào)告在小兒癌癥患者中靜脈施用HSV突變體HSV1716與腫瘤內(nèi)施用相比，全身遞送顯示出更好的耐受性，同時(shí)確定了相似的臨床反應(yīng)。

圖4野生型和重組型HSV基因組示意圖

　　(A)野生型HSV：IR,inverted repeats;UL:unique long;US:unique short.(B)具有單個(gè)和多個(gè)突變的溶瘤HSV。(C)轉(zhuǎn)錄靶向型溶瘤HSV。與腫瘤特異性相關(guān)的基因顯示為彩色框，其名稱(chēng)顯示在基因組線(xiàn)上方；基因產(chǎn)物的名稱(chēng)顯示在基因組線(xiàn)下方。紅色叉號(hào)表示通過(guò)刪除(Δ)或插入導(dǎo)致基因的失活。

圖5基因武裝型HSV基因組示意圖

　　綠色為鼠類(lèi)細(xì)胞因子，藍(lán)色為人類(lèi)細(xì)胞因子，粉紅色為異源融合蛋白，紫色為前藥轉(zhuǎn)化酶。紅色叉號(hào)表示通過(guò)刪除(Δ)或插入異源武裝基因?qū)е禄蚴Щ睢?/p>

　　痘苗病毒

　　痘苗病毒(VV)是一種雙鏈DNA病毒，基因組為180-200 kb，可在宿主細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中復(fù)制，具有感染細(xì)胞范圍廣、對(duì)腫瘤細(xì)胞的趨向性強(qiáng)、可攜帶大量外源DNA序列的能力等優(yōu)勢(shì)，可作為OV的研究候選。

　　為了提高痘苗病毒的選擇性復(fù)制和裂解能力，已經(jīng)進(jìn)行了的外源修飾包括病毒胸苷激酶（TK）、痘苗Ⅰ型干擾素結(jié)合蛋白（B18R）或痘苗生長(zhǎng)因子（VGF）的缺失。TK基因缺失使得痘苗病毒復(fù)制不依賴(lài)于宿主細(xì)胞TK的表達(dá)（圖6）。研究表明，在正常細(xì)胞的細(xì)胞周期中，受E2F轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控的TK的較高水平處于S期，但在癌細(xì)胞的整個(gè)細(xì)胞周期中其表達(dá)水平仍然很高。因此，痘苗病毒依賴(lài)宿主細(xì)胞核苷酸和TK活性的補(bǔ)償，TK缺失的痘苗主要在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制。B18R對(duì)Ⅰ型IFN的高親和力可引發(fā)Ⅰ型IFN信號(hào)的阻斷和痘苗病毒對(duì)健康細(xì)胞的感染。因此，通過(guò)B18R的缺失，健康細(xì)胞由于完整的Ⅰ型IFN應(yīng)答而對(duì)痘苗病毒感染不耐受，而癌細(xì)胞由于Ⅰ型IFN通路的中斷，易受痘苗病毒感染并較終溶解。VGF是一種表皮生長(zhǎng)因子（EGF）類(lèi)似物，通過(guò)與宿主細(xì)胞上的EGF受體（EGFR）結(jié)合激活RAS-MEK-ERK信號(hào)通路。因此，VGF的缺失導(dǎo)致病毒在EGFR-RAS信號(hào)異常的細(xì)胞（如癌細(xì)胞）中選擇性復(fù)制。

　　一種溶瘤痘苗病毒GLV-1h68（在臨床試驗(yàn)中也稱(chēng)為GL-ONC1）是通過(guò)用3個(gè)編碼β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖醛酸酶和腎素?zé)晒馑孛?綠色熒光（RLuc-GFP）融合蛋白的表達(dá)盒分別替換病毒TK、血凝素和F145L基因。2012年至2014年間，在頭頸部癌癥患者中進(jìn)行了靜脈注射GL-ONC1的I期臨床試驗(yàn)。30個(gè)月的隨訪(fǎng)顯示，GL-ONC1聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)化療可提高總體生存率，這項(xiàng)研究還證明了病毒的順利性。此外，由于標(biāo)記基因（包括Ruc-GFP、β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖醛酸酶）的表達(dá)，GL-ONC1還可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞裂解和腫瘤治療的情況。

　　Lister VV菌株的復(fù)制、細(xì)胞毒性和轉(zhuǎn)基因能力不受缺氧環(huán)境的影響。其突變體Pexa-Vec（pexastimogenedevacirepvec，也稱(chēng)為JX-594）可阻斷腫瘤血管生成，已進(jìn)入臨床試驗(yàn)（NCT01469611和NCT00554372）。JX-594在基因組上進(jìn)行了3處修飾：插入GM-CSF編碼基因以誘導(dǎo)系統(tǒng)免疫反應(yīng)，刪除TK基因以獲得腫瘤選擇性，以及在p7.5啟動(dòng)子控制下引入lac-Z基因。Park等人證明，JX-594靜脈給藥對(duì)難治性結(jié)直腸癌患者具有可接受的順利性。

圖6 TK與VV復(fù)制

　　TK的表達(dá)在正常細(xì)胞中普遍降低，但在快速增殖的腫瘤細(xì)胞中升高。TK缺失的痘苗病毒可以選擇性地感染腫瘤T細(xì)胞，因?yàn)樗哂懈吆塑账釒?kù)并開(kāi)始DNA復(fù)制。然而，在大多數(shù)正常細(xì)胞中，TK基因的缺失大大降低了病毒的復(fù)制能力，甚至不能使病毒復(fù)制。

　　呼腸孤病毒

　　這種無(wú)包膜RNA病毒包含9-12段線(xiàn)性雙鏈RNA。已有報(bào)道表明呼腸孤病毒在缺氧TME中能夠維持其復(fù)制和溶瘤能力，并且在感染期間下調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1型α)的表達(dá)。此外，呼腸孤病毒通過(guò)靜脈注射，可以利用外周血單核細(xì)胞（PBMCs）和樹(shù)突狀細(xì)胞（DCs）作為細(xì)胞載體來(lái)逃避介導(dǎo)合適病毒清除的中和抗體（NAbs），這種生物學(xué)特性確定了其全身遞送的合適性（圖12）。

　　Reolysin（也稱(chēng)為pelareorep）是一種天然存在的呼腸孤病毒3型Dearing毒株，已在KRAS激活的惡性腫瘤中顯示出強(qiáng)大的細(xì)胞毒性；其與化學(xué)療法、放射療法和免疫療法的組合已在各種臨床試驗(yàn)中得到評(píng)估。

圖12呼腸孤病毒的作用機(jī)制和發(fā)展概況

　　內(nèi)圈說(shuō)明了目前已知的呼腸孤病毒。1.在健康細(xì)胞中，抗病毒免疫反應(yīng)限制呼腸孤病毒的復(fù)制，防止被殺傷。相反，致癌信號(hào)通路使腫瘤細(xì)胞易受呼腸孤病毒復(fù)制和直接溶瘤。2.呼腸孤病毒在腫瘤血管系統(tǒng)和間質(zhì)中復(fù)制是由于細(xì)胞之間的相互作用改變抗病毒信號(hào)。3.腫瘤細(xì)胞的感染導(dǎo)致病毒子代、細(xì)胞因子和腫瘤相關(guān)抗原（TAAs）的釋放，從而啟動(dòng)天然抗腫瘤免疫，包括細(xì)胞因子介導(dǎo)的旁觀(guān)者殺傷和自然殺傷（NK）細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性。4.樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）吞噬TAAs并將其呈遞給CD4+和CD8+T細(xì)胞后產(chǎn)生適應(yīng)性抗腫瘤免疫，這有助于啟動(dòng)腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）。5.除了先天性和適應(yīng)性抗腫瘤免疫反應(yīng)外，還可誘導(dǎo)體液抗病毒免疫，從而產(chǎn)生呼腸孤病毒特異性中和抗體（NAbs）。在誘導(dǎo)抗腫瘤/抗病毒免疫應(yīng)答后，調(diào)節(jié)性免疫機(jī)制被“開(kāi)啟”以控制持續(xù)的免疫應(yīng)答，包括免疫檢查點(diǎn)的上調(diào)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）和/或髓源性控制細(xì)胞（MDSCs）水平的增加。

　　外圈突出了提高呼腸孤病毒的療效的重點(diǎn)研究領(lǐng)域，包括進(jìn)一步了解：（i）體液和/或細(xì)胞介導(dǎo)的抗病毒免疫對(duì)呼腸孤病毒療效的影響，這將為細(xì)胞伴侶的發(fā)展或需求提供信息。（ii）腫瘤微環(huán)境（TME）及其如何影響呼腸孤病毒溶瘤和抗腫瘤免疫。（iii）呼腸孤病毒用于直接溶瘤的細(xì)胞決定因素，包括呼腸孤病毒抗性機(jī)制。（iv）轉(zhuǎn)基因呼腸孤病毒平臺(tái)的潛在益處。（v）呼腸孤病毒計(jì)劃，以較大限度地提高病毒的交付和效力，包括較佳的病毒管理途徑。（vi）旨在促進(jìn)直接溶瘤和抗腫瘤免疫反應(yīng)的組合方法。

　　麻疹病毒

　　麻疹病毒(Mesles virus,MV)屬于副粘病毒科，是一種有包膜的病毒，具有不分節(jié)段的負(fù)鏈RNA，RNA基因組包含6個(gè)編碼8種病毒蛋白的基因（圖10）。該病毒在宿主細(xì)胞上有3個(gè)受體：信號(hào)淋巴細(xì)胞激活分子(SLAM/CD150)、CD46和nectin-4（脊髓灰質(zhì)炎病毒受體樣4，PVRL4）。由于CD46在許多癌細(xì)胞中的過(guò)度表達(dá)，MV具有感染腫瘤細(xì)胞的天然能力。除了自然感染機(jī)制外，一些人為修飾可以提高麻疹的溶瘤功效（圖11），例如制造更強(qiáng)的癌癥特異性嗜性、武裝以提高癌細(xì)胞殺傷作用以及屏蔽以避免阻礙治療功效的抗病毒免疫反應(yīng)。由于麻疹疫苗的廣泛使用，抗病毒免疫對(duì)于基于MV的溶瘤藥物來(lái)說(shuō)是一個(gè)特別困難的障礙?？捎脕?lái)避免脫靶副作用和將MV特異性地重新定向到癌細(xì)胞的策略包括插入腫瘤特異性配體、插入整合素結(jié)合肽、插入單鏈T細(xì)胞受體和修飾包膜融合特性。此外，1型干擾素應(yīng)答的缺陷是MV腫瘤選擇性的另一個(gè)原因。

　　MV-NIS是一種表達(dá)碘化鈉同向轉(zhuǎn)運(yùn)體的MV突變體，受感染的腫瘤細(xì)胞對(duì)I131的攝取增加，從而在腫瘤細(xì)胞中產(chǎn)生放射毒性；其順利性和病毒復(fù)制的合適性已在復(fù)發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤患者的I期試驗(yàn)中得到證明。

　　在瑞士，使用麻疹病毒Edmonston-Zagreb（MV-EZ）株進(jìn)行了一項(xiàng)I期臨床試驗(yàn)，MV-EZ在5名皮膚T細(xì)胞淋巴瘤(CTCL)患者接受IFN-α預(yù)處理后進(jìn)行瘤內(nèi)給藥。MV-EZ治療引起IFNγ產(chǎn)生增加和CD4/CD8比率降低，帶來(lái)了更好的預(yù)后。進(jìn)一步的研究證明了不同溶瘤MV菌株的合適性和順利性。

圖10麻疹病毒及其基因組

　　(a)麻疹病毒的示意圖。麻疹病毒是一種有包膜的負(fù)鏈RNA病毒。RNA基因組受核蛋白(N)保護(hù)，核蛋白(N)與RNA依賴(lài)性RNA聚合酶(RdRp)（稱(chēng)為大蛋白(L)）及其輔因子磷蛋白(P)相關(guān)這些共同構(gòu)成了被基質(zhì)(M)包圍的核糖核蛋白復(fù)合體(RNP)。兩種病毒糖蛋白，血凝素(H)蛋白和融合(F)蛋白，從脂質(zhì)雙層突出并參與病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞。(b)麻疹病毒基因組。MV基因組由15,894個(gè)RNA核苷酸組成，包括六個(gè)轉(zhuǎn)錄單位，每個(gè)轉(zhuǎn)錄單位由三核基因間序列隔開(kāi)。蛋白質(zhì)V和C是由P基因的替代RNA轉(zhuǎn)錄物產(chǎn)生的非結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)。

圖11溶瘤MV的靶向、武裝和隱身

　　（a）溶瘤MV的靶向性和腫瘤特異性可以在多個(gè)水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)。進(jìn)入靶向：此處顯示的是完全重新靶向的MV，它通過(guò)與MV H蛋白融合的scFv識(shí)別腫瘤抗原。進(jìn)入后靶向：溶瘤MV攜帶微小RNA的靶位點(diǎn)，這些位點(diǎn)存在于健康細(xì)胞中，但在惡性細(xì)胞中丟失。這種microRNA控制的MV在表達(dá)同源microRNA的健康細(xì)胞中被強(qiáng)烈減弱，但對(duì)腫瘤細(xì)胞仍然完全合適。（b）溶瘤MV可以被設(shè)計(jì)編碼治療性轉(zhuǎn)基因。（c）溶瘤MV的隱匿。左圖：MV與密切相關(guān)的副粘病毒（犬瘟熱病毒，CDV）的包膜糖蛋白的假型分析。右圖：為了避免被預(yù)先存在的抗MV抗體中和，可以使用聚合物包膜結(jié)構(gòu)屏蔽單個(gè)病毒粒子。

　　新城疫病毒

　　新城疫病毒(NDV)屬于副粘病毒科，是一種具有非節(jié)段負(fù)鏈RNA的禽類(lèi)包膜病毒，其血凝素-神經(jīng)氨酸酶(HN)蛋白與宿主細(xì)胞上含唾液酸的受體結(jié)合會(huì)觸發(fā)病毒的內(nèi)吞作用。NDV的復(fù)制發(fā)生在細(xì)胞質(zhì)中，且從未觀(guān)察到與宿主基因組的任何重組。由于對(duì)IFN-α和IFN-β高度敏感，宿主防御機(jī)制會(huì)迅速阻止NDV復(fù)制，而癌細(xì)胞由于I型干擾素反應(yīng)較弱，故而對(duì)NDV敏感（圖7）。新城疫病毒的溶瘤活性與誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡和通過(guò)增加細(xì)胞因子（IL-12、GM-CSF、RANTES和I型干擾素）激活固有免疫系統(tǒng)有關(guān)。研究表明，新城疫病毒HN蛋白是一種合適的抗原，能增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷反應(yīng)。此外，基因工程手段也可進(jìn)一步改進(jìn)NDV的溶瘤效果（圖8）。

圖7新城疫病毒(NDV)激活先天性和適應(yīng)性抗腫瘤免疫反應(yīng)

　　NDV選擇性地感染具有缺陷的抗病毒防御的腫瘤細(xì)胞。由傳感器（如RNA解旋酶RIG-1）介導(dǎo)的細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)導(dǎo)致I型IFN和相關(guān)基因的表達(dá)。自分泌和旁分泌IFN信號(hào)上調(diào)MHC I類(lèi)和II類(lèi)呈遞、共刺激分子和細(xì)胞表面的免疫檢查點(diǎn)。此外，細(xì)胞因子和趨化因子的釋放募集了先天效應(yīng)細(xì)胞，例如NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞以及抗原呈遞細(xì)胞(APC)。病毒介導(dǎo)的直接溶瘤使得腫瘤抗原、PAMP和DAMP釋放，激活A(yù)PC?；罨腁PCs刺激T細(xì)胞，產(chǎn)生針對(duì)腫瘤和病毒抗原的細(xì)胞溶解性T細(xì)胞；然而，激活的T細(xì)胞的效應(yīng)器功能可以通過(guò)上調(diào)腫瘤細(xì)胞和APCs上的PD-L1以及T細(xì)胞上的PD-1和CTLA-4而受到控制。這些負(fù)反饋機(jī)制的上調(diào)為新城疫病毒與免疫檢查點(diǎn)控制劑的結(jié)合提供了理論基礎(chǔ)。

圖8通過(guò)重組基因工程增強(qiáng)NDV抗腫瘤免疫反應(yīng)

　　基因工程可用于產(chǎn)生具有更大潛力刺激抗腫瘤免疫反應(yīng)的NDV毒株。首先，經(jīng)過(guò)工程改造以表達(dá)細(xì)胞因子（例如GM-CSF或白細(xì)胞介素）的NDV可以增加先天效應(yīng)細(xì)胞（例如抗原呈遞細(xì)胞（APC））的募集。其次，NDV可用作靶向特定腫瘤抗原的治療性疫苗，例如致癌病毒抗原、移碼突變或突變的自身抗原。三，NDV可以被設(shè)計(jì)為表達(dá)單鏈可變片段或完整的抗腫瘤抗體，以通過(guò)效應(yīng)細(xì)胞誘導(dǎo)抗體依賴(lài)性細(xì)胞毒性。

　　柯薩奇病毒

　　柯薩奇病毒屬于小核糖核酸病毒科，是一種具有單鏈RNA基因組的無(wú)包膜病毒。與NDV一樣，柯薩奇病毒在宿主細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中復(fù)制，降低了插入突變的可能性，并且不需要基因改造來(lái)實(shí)現(xiàn)溶瘤活性。

　　作為OV，研究較廣泛的是柯薩奇病毒A21(CVA21)，它是一種天然存在的腸道病毒。CVA21以細(xì)胞內(nèi)粘附分子-1(ICAM-1)作為主要受體，利用衰變加速因子(DAF)作為輔助受體來(lái)感染宿主細(xì)胞。研究表明，一些實(shí)體瘤，包括黑色素瘤、結(jié)腸癌、乳腺癌、頭頸癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌和胰腺癌都高表達(dá)ICAM-1和DAF受體。因此，CVA21可能對(duì)癌細(xì)胞具有天然的趨向性。

　　柯薩奇病毒B3型(CVB3)是另一種重要的溶瘤柯薩奇病毒。研究表明，由于DAF和柯薩奇-腺病毒受體(CAR)的過(guò)度表達(dá)（圖9），CVB3還具有對(duì)癌細(xì)胞的天然趨向性，是非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞。CVB3的抗癌活性取決于其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力。PI3K/AKT信號(hào)通路加速了CVB3的復(fù)制，由于該通路在大多數(shù)癌癥中被激活，CVB3能夠在這些癌細(xì)胞中選擇性復(fù)制。

圖9 CVB3與細(xì)胞受體的相互作用

　　原CVB3菌株Nancy使用CAR進(jìn)入細(xì)胞，而CVB3變體PD可以通過(guò)N-和6-O-硫酸乙酰肝素和CAR感染細(xì)胞。上圖：CAR陽(yáng)性細(xì)胞可以感染PD和Nancy菌株。下圖：當(dāng)N-和6-O-硫酸乙酰肝素在細(xì)胞表面表達(dá)時(shí)，CAR陰性細(xì)胞不能被Nancy菌株感染，但會(huì)被PD感染。

　　其他病毒

　　除了上述病毒之外，還有許多其他病毒正在研究作為用于癌癥治療的溶瘤劑，包括脊髓灰質(zhì)炎病毒、細(xì)小病毒、塞內(nèi)卡谷病毒、水泡性口炎病毒、馬拉巴病毒以及逆轉(zhuǎn)錄病毒。

　　表1總結(jié)了不同種類(lèi)的溶瘤病毒的生物學(xué)特性及其在臨床上的應(yīng)用情況。

　　表1 OV的生物學(xué)特性和臨床應(yīng)用

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